1. 神经科学
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阿尼林促进化粪池装配预防中枢神经系统髓鞘病理性外流

  1. 米歇尔·埃尔维格
  2. 朱丽亚帕茨格
  3. 安娜·M·斯泰尔
  4. 帕亚姆·迪巴吉
  5. 马雷克·海尔曼
  6. 英戈·海尔曼
  7. 雷蒙娜·B·荣格
  8. 凯瑟琳库施
  9. 维贝克-莫比乌斯
  10. 奥拉夫詹恩
  11. 克劳斯·阿米恩·纳夫
  12. 豪克·B·沃纳 是通讯作者
  1. 马克斯普朗克实验医学研究所,德国
  2. 纳米显微镜和大脑分子生理学中心,德国
  3. 马丁路德大学德国
研究进展
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引用本文AS:188bet体育电竞Elife 2019;8:E43888 DOI:10.7554/188bet体育电竞elife.43888

摘要

髓鞘作为轴突的绝缘体,促进沿轴突的快速神经传导。通过透射电子显微镜,一个健康的髓鞘包括紧密的膜层螺旋围绕横截面轴突。以前,我们将最内层非致密髓鞘层中的脓毒蛋白丝组装确定为中枢神经系统(CNS)髓鞘成熟的最新步骤之一(Patzig等人,2016)。在这里,我们发现少突胶质细胞中细胞骨架衔接蛋白anillin(anln)的丢失破坏了髓鞘败血素的装配。从而引起病理性髓鞘外翻。由于髓鞘外翻是髓鞘疾病和脑老化的一个不太清楚的标志,我们评估了轴突/髓鞘单位。安伦-聚焦离子束扫描电镜(FIB-SEM)突变小鼠;髓鞘外壁三维重建为多个致密膜层的大片。我们认为,阿尼林依赖性的化粪素丝装配支架成熟的髓鞘,促进健康中枢神经系统的快速神经传导。

https://doi.org/10.7554/188bet体育电竞elife.43888.001

介绍

快,脊椎动物中枢神经系统(CNS)中的跳跃性神经冲动传导是由具有多层绝缘少突胶质膜的轴突所提供的。被称为髓鞘Nave和Werner,二千零一十四哈特琳和科尔曼,二千零七)沿着细胞外膜表面(周期内线)的髓鞘压缩涉及胆固醇相关跨膜蛋白,如蛋白脂质蛋白(PLP)(Simons等人,2000年沃纳等人,2013年)表现出粘附力(Bakthi等人,2013年Bizzozero等人,二千零一)防止髓鞘片层分裂(吕德斯等人,2017年M·比尤斯等,二千零一十六Rosenbluth等人,二千零六)细胞内膜表面(主要致密线)髓鞘碱性蛋白(MBP)通过覆盖膜磷脂(MBP)带负电荷的头部,促进髓鞘层的紧密结合。Musse等人,2008年纳瓦兹等人,2009年纳瓦兹等人,2013年)环核苷酸磷酸二酯酶(CNP)的存在可以抵消MBP的粘附功能。从而调节侧翼致密髓鞘的细胞质通道的发育闭合。Snaidero等人,2017年)在成熟髓鞘中,因此,CNP主要局限于非致密髓鞘(布鲁纳等人,一千九百八十九特拉普等人,一千九百八十八)PLP的相关性,髓鞘常规超微结构的MBP和CNP通过其在生化纯化的髓鞘膜中的高丰度来反映。JAN等,2009年)和相应小鼠突变体的髓鞘缺陷。

除了单个髓鞘层的分层之外,在一些髓鞘突变体中,髓鞘的病理失稳表现为整堆致密髓鞘膜的病理性外翻。()帕茨格等人,2016年)以及正常的大脑老化(彼得斯,2002年斯图洛克,1976年)我们最近发现髓鞘外流与败血症的丢失有关,是髓鞘蛋白质组中相对较低丰度的细胞骨架蛋白(帕茨格等人,2016年)脓毒症被广泛表达并控制与其相关的膜的硬度。桥梁和格拉德费尔特,2015年吉尔登和克鲁梅尔,二千零一十)局限于未压实,与内部最致密的髓鞘膜相邻的adaxon髓鞘层,髓鞘脓毒蛋白丝由单体sept2组装而成,SEPT4,在1:1:2:2化学计量学中的sept7和sept8(帕茨格等人,2016年)这标志着亚单位的典型但独特的组成,当与其他细胞类型的败血症的高阶结构相比(Barral和Kinoshita,2008年多拉特等,二千零一十四)最近,我们提出,脓毒蛋白丝提供了一种支架,防止从adaxonal髓鞘膜分离致密的髓鞘层,从而使整个髓鞘外翻(帕茨格等人,2016年

败血酶与果蝇胚胎中含有p-结构域的衔接蛋白anillin(anln)及其同系物相关。El Amine等人,2013年领域等,2005年Liu等人,二千零一十二)芽殖酵母埃卢埃等人,二千零一十二康等,2013年Tasto等人,二千零三)和小鼠NIH3T3成纤维细胞(Kinoshita等人,2002年)在这里,阿尼林在收缩性脓毒蛋白环形成中的作用是细胞分裂的一个保守步骤。皮克尼和马多克斯,二千零一十)和细胞分裂所必需的(张和马多克斯,二千零一十)然而,在有丝分裂后的细胞中,化粪池和苯胺之间的相互作用尚不清楚。在成人中枢神经系统中,表达安伦当用rna-seq(www.web.stanford.edu/group/barres_lab/cgi-bin/igv_cgi_2.py?LNAM= ANLN张艺谋,二千零一十四)单细胞转录组学(网址:www.linnarssonlab.org/cortex泽塞尔等,2015年)和原位杂交(mouse.brain-map.org/gene/show/44585小鼠莱因等人,二千零七

在这里,我们表明少突胶质细胞阿尼林在髓鞘形成中起着关键作用。条件小鼠突变体缺乏安伦-成熟少突胶质细胞中的基因未能装配化粪池细丝,显示类似于SEBT8-突变小鼠帕茨格等人,2016年)神经传导速度降低。因此,这项工作为在支架式中枢神经系统髓鞘中组装髓鞘败血素丝建立了一个关键功能,以实现快速神经传导。因此显示了与细胞分裂无关的阿尼林的重要功能。

结果和讨论

为了解决阿尼林和髓鞘败血症之间的功能联系,我们首先问的是,这种蛋白质是否也富含中枢神经系统髓鞘。的确,当用p75从小鼠大脑中生化纯化时,在髓鞘中检测到阿尼林。然而,当加载相同数量的蛋白质时,在大脑溶解液中几乎无法检测到。图1a)这意味着阿尼林富含髓鞘,类似于sept8变异体1(sept8_v1;根据ensembl.org的命名法)帕茨格等人,2016年)或髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)(林宁顿等,一千九百八十四)相比之下,髓鞘中轴突标记物微管蛋白β3/Tuj1与脑溶解物相比减少(图1a)为了确定阿尼林的定位,我们对纵行脊髓切片进行了免疫组化和共聚焦显微镜检查。我们发现,阿尼林免疫标记与轴突神经丝标记(NF)相似,但不重叠。图1B)大多数阿尼林免疫标记都能使人联想到纵向髓鞘化脓毒蛋白丝(图1C帕茨格等人,2016年

阿尼林与髓鞘败血症的共分布。

())从野生型小鼠脑中纯化的髓鞘在p75与脑溶解物相比的免疫印迹表明,与septin 8变异体1(sept8_v1)相似,阿尼林(anln)富含髓鞘。装载相同量的蛋白质。髓鞘标志物MOG和轴突标志物TUJ1作为对照。印迹显示每个基因型有2只小鼠,代表每个基因型有3只小鼠。()B-C)免疫荧光信号)和Sept7(绿色输入C)沿着神经丝标记的轴突纵向延伸。B-C)额外的免疫阳性点刺(星号在)与丝状结构(箭头位于B、C)小组显示了p75 wt小鼠共聚焦叠的最大投影和纵切面脊髓的三维重建。代表三只老鼠的图像。()D)从野生型小鼠脑中纯化的髓鞘在p15的免疫印迹,P18P21和P24表明,随着成熟,髓鞘中的ANLn含量增加。髓鞘败血症(9月2日,SEPT4,9月7日,9月8日)和MAG作为对照。blot显示每个时间点有1个鼠标。()e)纵切面wt视神经免疫标记检测到靠近隔8(绿色)的ANLN(红色);共标记结构(箭头)偶尔出现在p21处,经常出现在p28处,而不是p15处。tuj1作为轴突标志物。代表三个实验的图像。

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考虑到安伦随着少突胶质细胞祖细胞向髓鞘化少突胶质细胞的分化,mRNA增加了10倍以上。张艺谋,二千零一十四)我们测试了安仑的丰度是否随着髓鞘的发育成熟而增加。的确,用免疫印迹法检测小鼠出生后第15天(第15页)脑中纯化的髓鞘。P18P21和P24,ANLN的丰度增加(图1D)类似于9月2日。当免疫标记Anln和sept8在p15的纵向视神经切片上时,P21和P28,第一个共标记结构偶尔在p21处被检测到,但在p28处经常被发现。图1E)在其他白质区,ANLN免疫标记在很大程度上接近于SEPT8免疫标记。通过对野生型小鼠75(图1-图补充1a,b)因此,细胞骨架衔接蛋白anln在成熟少突胶质细胞中表达丰富。其主要与局限于未压实的阿达松髓鞘层的髓鞘化粪素丝共同分布。

我们以前注意到,在一些髓鞘突变小鼠中,病理性髓鞘外翻的存在与髓鞘败血症和ANLN(帕茨格等人,2016年)然而,安林的减少是否仅仅是败血素丢失的一种表观现象,或者安林是否在败血素丝的装配中起作用,目前尚不清楚。为了区分这些替代假设,我们产生了小鼠突变体,其中安伦基因两侧有loxp位点(图2-图补充1a)培育出合适的品种安伦FLUX/FLUX中国共产党CRE/WT老鼠,其中cre重组酶在CNP公司启动子(Lappe-Siefke等人,二千零三)介导重组(图2-图补充1b)髓鞘少突胶质细胞。条件突变体和对照小鼠以预期的频率出生,主要的白质区域正常发育,通过光镜观察银浸染后的髓鞘来判断。图2a,a''。然而,电子显微镜分析显示中枢神经系统中存在大量髓鞘外翻。安伦FLUX/FLUX中国共产党CRE/WT老鼠(图2B,C)非常相似SEBT8空/空SEBT8FLUX/FLUX中国共产党CRE/WT突变体(突变体)帕茨格等人,2016年)髓鞘厚度分析(图2d,d)髓鞘化轴突的百分比(图2E)退化/退化轴突(图2F)和继发性神经病理学(图2-图补充2)未发现进一步的异常安伦FLUX/FLUX中国共产党CRE/WT老鼠,暗示髓鞘外翻是一种非常特殊的神经病理学。

图2含3种补充剂 看到一切
在缺乏少突胶质细胞表达的小鼠中,髓鞘外翻和神经传导速度降低。

()A–A')银浸染(棕色)可观察到髓鞘细胞缺乏ANLn的小鼠的髓鞘纤维束(安伦佛罗里达州中国共产党CRE/WT-老鼠;安伦和对照组小鼠(安伦佛罗里达州在P75。())显示冠状脑切片;A)显示小脑的矢状切面。代表每种基因型三只小鼠的图像。用于生成和验证安伦CKO小鼠见图2-图补充件1.())视神经的电子显微图显示了第75页的髓鞘外翻。点画线突出髓鞘流出;相关联的轴突用星号标记。()C)定量评价视神经的电子显微照片显示成人的髓鞘外翻逐渐出现。安伦佛罗里达州中国共产党CRE/WT老鼠(安伦CKO)。平均+/SEM。n=4–6只小鼠,每种基因型和年龄;双尾未配对t-试验p14 p=0.0076;P75 P=0.0009;6Mo p=0.0007。()D,D’)6个月时视神经电子显微图的G比分析显示,在6个月时,正常的髓鞘厚度安伦CKO小鼠。平均+/SEM。根据双向方差分析,不显著(p=0.9279)。()e)对6个月时视神经的电子显微照片进行定量评估,结果显示在6个月时有髓鞘轴突的正常频率。安伦CKO小鼠。平均+/SEM。n=每个基因型4–5只小鼠;根据双尾未配对t检验,不显著(n.s.)(p=0.1827)。()f)对6个月时视神经的电子显微照片进行定量评估,结果表明,在6个月内,轴突退化/退化的频率没有增加。安伦CKO小鼠。平均+/SEM。n=每个基因型4–5只小鼠;根据双尾未配对t检验,不显著(n.s.)(p=0.8664)。神经病理学的免疫组化评估见图2-图补充2.()G电生理测量显示脊髓神经传导速度降低。安伦与对照组相比(安伦佛罗里达州)六个月大的老鼠。平均+/SEM。n=7–11只小鼠/基因型;双尾未配对t检验(p=0.0149)。关于评估Ranvier节点的密度和尺寸,请参见图2-图补充3.

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测试髓鞘是否在安伦FLUX/FLUX中国共产党CRE/WT小鼠在体内损害中枢神经系统功能,我们在6个月大时测量了脊髓中的神经传导。的确,神经传导速度降低了15.5%。安伦FLUX/FLUX中国共产党CRE/WT与对照组相比(图2g)非常相似SEBT8-突变体帕茨格等人,2016年)考虑到神经传导减慢可能是由Ranvier()节点的结构变化引起的。Arancibia-C_rcamo等人,2017年)我们对淋巴结和副节标记物nav1.6和caspr进行免疫组化。分别确定了节点的密度(图2-图补充3a以及它们的长度和直径(如图2-图补充3b)这项分析没有发现任何结节或副节异常安伦FLUX/FLUX中国共产党CRE/WT老鼠(图2-图补充3c–f)尽管我们不能正式排除在安伦FLUX/FLUX中国共产党CRE/WT老鼠,髓鞘外翻是神经传导速度降低的最可能原因。

在分子水平上,我们问安伦-成熟少突胶质细胞中的基因影响髓鞘的蛋白质组成。果不其然,用免疫印迹法分析从脑中纯化的髓鞘,检测不到抗中性粒蛋白。安伦FLUX/FLUX中国共产党CRE/WT老鼠(图2-图补充1c)有趣的是,在这些突变体中,髓鞘中的sept8丰度降低(图2-图补充1c)这促使我们通过定量无标签质谱分析整个髓鞘蛋白质组。图3-源数据1)在从对照小鼠脑中纯化的髓鞘中很容易检测到ANLn,但在安伦FLUX/FLUX中国共产党CRE/WT髓磷脂图3-图补充1a)所有髓鞘败血症的丰富性(9月2日,SEPT4,9月7日,从大脑中纯化的髓鞘中,sept8)明显减少。安伦FLUX/FLUX中国共产党CRE/WT老鼠(图3A,B图3-图补充1b)有趣的是,罗亚家族两个GTP酶的丰度,CDC42和RHOB,也出现了减少,虽然低于2倍变化的应用阈值(图3-图补充1b)重要的是,主要髓鞘标记蛋白的丰度(图3-图补充1c图3C)和与肌动蛋白细胞骨架或微管相关的细胞骨架蛋白(图3-图补充1d)没有改变。

缺乏ANLN少突胶质表达小鼠的髓鞘组成。

())火山图总结了基因型依赖的定量髓鞘蛋白质组分析。数据点代表了在p75从大脑中纯化的髓鞘中定量蛋白质。安伦CKO与安伦佛罗里达州小鼠(每个基因型3只小鼠)。将数据点绘制为X轴上的log2转换褶皱变化(fc),与Y轴上的−log10转换Q值相对应。水平红色虚线表示Q=0.01的Q值;垂直黑色虚线标记±1 log2倍变化阈值,表示髓鞘中蛋白质含量减半或加倍,分别。代表髓鞘脓毒蛋白单体的数据点(sept2,SEPT4,9月7日,sept8)以浅红色突出显示,并给出蛋白质名称;注意它们的丰度在安伦CKO与安伦佛罗里达州髓磷脂。还请注意,由于在安伦CKO髓鞘。对于显示髓鞘中单个蛋白质丰度的基因型相关比较的条形图,参见图3-图补充1a-d.有关原始数据集和精确的Q值,请参见图3-源数据1.()免疫印迹法证实了阿尼林(anln)的缺乏和败血症的强烈减少(sept2,SEPT4,9月7日,从脑中纯化的髓鞘安伦CKO小鼠。检测atpase-na+/k+转运亚单位α3(atp1a3)作为对照。印迹显示每个基因型有3只小鼠。()C)免疫印迹显示典型髓鞘蛋白(plp/dm20,SIRT2,CD9Ca2)在从大脑中纯化的髓鞘中没有改变。安伦CKO小鼠。ATP1A1作为控制。印迹显示每个基因型有3只小鼠。()D)ptdins(4,5)p基因型依赖性定量评价(管道)–从大脑中纯化的髓鞘水平安伦CKO小鼠与对照组相比(安伦佛罗里达州在P75。平均+/SEM。n=每个基因型6只小鼠;双尾不成对t检验;ptdins(4,5)P型P=0.0435。()e)qrt-pcr检测对照组白质(胼胝体)中编码阿尼林和髓鞘败血症的mRNAs的丰度。安伦佛罗里达州安伦CKO小鼠。注意安伦几乎无法检测到安伦当大量的9月2日9月4日9月7日SEBT8mRNAs没有改变。平均+/SEM。n=每个基因型6只小鼠;双向方差分析;安伦P<0.0001,9月2日p>0.9999,9月4日p>0.9999,9月7日p>0.9999,SEBT8P>0.9999。

https://doi.org/10.7554/188bet体育电竞elife.43888.008

由于膜磷脂磷脂酰肌醇(4,5)-二磷酸(ptdins(4,5)p)的减少)髓磷脂PTENFLUX/FLUX中国共产党CRE/WT老鼠会导致败血症和anln()的损失。帕茨格等人,2016年)我们问是否反之亦然髓鞘中缺乏抗中性粒蛋白会影响ptdins(4,5)P。-水平。的确,通过定量评估无标签脂质提取物(Goebbels等人,二千零一十K.Nyng等人,2008年)我们发现ptdins(4,5)p的丰度降低。从脑中纯化的髓鞘安伦FLUX/FLUX中国共产党CRE/WT与对照组相比(图形三维

通过qrt-pcr,的cDNA片段9月2日9月4日七、七SEBT8以同样的效率从突变和控制语料库callosi()中扩增。图3E)提示髓鞘脓毒症的丢失是一种继发于ANLN缺乏的转录后事件。最有可能的是髓鞘化粪素单体如果不与丝状高阶结构结合,就会降解。其形成由ANLN促进。的cDNA片段RHOB和CDC42突变和控制语料库callosi(图3-图补充1e)相反地,的cDNA片段安伦安伦FLUX/FLUX中国共产党CRE/WT呼叫语料库(图3E)表示安伦根据RNA-seq数据,成人中枢神经系统中的mRNA在成熟少突胶质细胞中高度富集。泽塞尔等,2015年张艺谋,二千零一十四

三维测定髓鞘外翻的形态。我们用聚焦离子束扫描电子显微镜(fib-sem)观察了从安伦FLUX/FLUX中国共产党CRE/WT和对照鼠,在每个组织中覆盖约23微米的深度。控制神经,轴突质膜重建(假蓝色图4)和髓鞘(假黄色图4发现有髓鞘轴突与其髓鞘有很大的规则联系(如图4A,A视频1)在类似的视神经块中安伦FLUX/FLUX中国共产党CRE/WT老鼠,fib-sem允许对一些髓鞘外流进行三维重建(图4b',b''视频2视频3)大部分在节间节段;我们只观察到靠近Ranvier节的单个髓鞘外翻。观察到的髓鞘外翻长度在10微米到15微米之间。因此,髓鞘外翻不采用针状形状,而是表现为一大片致密的多层膜堆,这些膜堆从髓鞘轴突延伸相当远。

Anln-CKO小鼠髓鞘外翻的三维重建。

()A—C)聚焦离子束扫描电子显微镜(FIB-SEM)显微照片和三维重建对照组视神经有髓轴突段(蓝色)和代表轴突/髓鞘单元的髓鞘(黄色)的质膜(安伦佛罗里达州A,A安伦CKO(B,B’,B’,B’’)小鼠5.5个月注意到髓鞘重建在与相应的轴突A,A)至少10μm。一个单独的髓鞘外翻(B’)和相应的轴突在b,b'中重建超过20μm。同一块的所有髓鞘外流(如B、B’)在b’’中重建,其相应轴突(inB'',B'')请注意,髓鞘外壁代表大量的多层膜叠层,这些膜叠层与各自的髓鞘轴突有很大的距离,通常显示10微米到15微米之间的纵向尺寸。见视频1-.

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视频1
在对照小鼠中正常出现的轴突/髓鞘单元的fib-sem和3d重建。
https://doi.org/10.7554/188bet体育电竞elife.43888.012
视频2
纤维扫描电镜和三维重建一个选定的髓鞘外翻安伦CKO小鼠。
https://doi.org/10.7554/188bet体育电竞elife.43888.013
视频3
一个组织块内多个髓鞘外翻的fib-sem和3d重建安伦CKO小鼠。
https://doi.org/10.7554/188bet体育电竞elife.43888.014

紧凑型中枢神经系统髓鞘外翻是许多髓鞘相关疾病模型的神经病理学标志。帕茨格等人,2016年)以及正常的大脑老化(彼得斯,2002年斯图洛克,1976年)局限于未压实的adaxonal髓鞘层,即在最内层致密的髓鞘膜下,脓毒蛋白丝支架髓鞘结构,从而防止髓鞘外翻的出现(帕茨格等人,2016年)表型安伦FLUX/FLUX中国共产党CRE/WT小鼠与缺乏sept8的小鼠非常相似,一种对髓鞘化粪池细丝装配必不可少的化粪池单体(帕茨格等人,2016年)因此,目前的研究表明,阿尼林是中枢神经系统髓鞘中败血素丝装配的关键,缺乏这些丝会导致髓鞘外翻,导致神经传导速度降低。

在酵母细胞分裂过程中,ptdins(4,5)P型将苯胺同系物mid2p招募到卵裂沟处的膜上,在母子细胞的出芽处,它又是化粪池亚单位聚合成环的关键。贝尔丁等,二千零一十Liu等人,二千零一十二)在分子水平上,ptdins(4,5)p之间的相互作用,苯胺和败血症可能主要保存在分裂细胞和成熟少突胶质细胞之间,有丝分裂后。然而,细胞分裂时,抗中性粒蛋白影响肌动蛋白丝的微管和肌球蛋白依赖性捆绑(希克森和奥法雷尔,2008年希克森和奥法雷尔,2008 8B)因为髓鞘包皮涉及肌动蛋白分解(纳瓦兹等人,2015年Zuchero等人,2015年)而髓鞘压缩需要贩运市场营销计划沿微管的mRNA(Mü勒等人,2013年Thakurela等人,二千零一十六)我们指出没有证据显示较薄或未压缩的髓鞘安伦FLUX/FLUX中国共产党CRE/WT老鼠。相反,在髓鞘成熟的最新阶段,需要抗磷脂抗体。即。,对于脓毒蛋白依赖的髓鞘支架,而不是其肌动蛋白/小管蛋白依赖的生物合成和压实。

髓鞘是中枢神经系统中最长寿的结构之一。富山等。2013年)组件的周转率特别慢(Lasiene等人,2009年吕德斯等人,二千零一十九Yeung等人,二千零一十四杨等人,2013年)不能物理稳定髓鞘结构导致髓鞘外翻并影响神经传导速度。因此,我们建议ptdins(4,5)p/由败血素丝形成的依赖于阿尼林的髓鞘支架是髓鞘成熟的关键步骤。

材料和方法

小鼠模型

胚胎干细胞(ES)中含有安伦基因从欧洲条件小鼠诱变计划(杜仲)获得。将ES微注射到来自C57BL/6N小鼠的囊胚中,胚胎被移植到假怀孕的养母身上,产生两个嵌合体雄性。对于ES克隆EPD0545U 1U F09,通过与C57BL/6N雌性杂交,实现了种系传播。产鼠窝藏安伦新西兰等位基因。LACZ neo盒在体内与表达Flip重组酶的小鼠杂交后被切除。129S4/Svjaesor GT(罗莎)26SORTM1(FLP1)DYM/J;反向交叉进入C57BL/6N)产鼠携带安伦弗洛克斯等位基因。使髓鞘细胞中的ANLn表达失活,外显子4经适当的体内杂交后被切除。安伦弗洛克斯小鼠表达Cre重组酶,对照组为CNP公司启动子(Lappe-Siefke等人,二千零三)为简单起见,安伦佛罗里达州中国共产党CRE/WT小鼠也被称为安伦条件淘汰(安伦CKO)。常规基因分型安伦等位基因如图2-图补充1b用敏感引物p1(5’-gacatagccc-tcaggttcagg)进行PCR;结合第一个loxp位点的5’与反义引物p2(5’-gaatcctgca-tggacagagag;结合loxp位点两侧的片段)。和p3(5’-gaggtcagac catacttcg;结合第三个loxp位点的3’)。PCR基因分型CNP公司等位基因带有引物。二千零一十六(5’-GCCTTCAAC TGTCCATCTC),第1部分:七千三百一十五(5’-CCCAGCCTT TTATACAC),即4193个(5’-CCTGGAAAT GCTTCTGTCCG)和四千一百九十二(5’-cagggttta-taagcaatccc)。实验性突变小鼠尽可能与小动物对照组一起分析。将小鼠饲养在马克斯普朗克实验医学研究所的小鼠设施中,光/暗循环12小时,每笼饲养2-5只小鼠。根据德国动物保护法,所有实验均由Nieders chsisches Landesamt F r Verbraucherschutz und Lebensmittelsicherheit(许可证33.19-42502-04-15/1833)批准。

量化和统计分析

样本量是根据之前对类似参数的分析得出的,例如in(帕茨格等人,2016年)所有的量化都是在基因型方面进行的。条形图显示平均值和平均值的标准误差(SEM)。在graphpad prism 6.0中进行了统计测试。根据实验组和软件的建议选择测试。为了测试方差,F-试验在格拉帕德棱镜6.0中进行。graphpad在线测试http://graphpad.com/quickcalcs/grubbs1.cfm用于测试异常值;然而,没有从数据中删除异常值。显著性水平设为p<0.05(*),P<0.01(**),P<0.001(**)。图图例中给出了精确的p值。髓鞘蛋白质组分析,Q值通过“髓鞘蛋白质组分析”一节中详述的R数据分析计算,并在图3-源数据1.

电子显微镜

对于传统的透射电子显微镜,采用化学固定或高压冷冻和冷冻替代制备样品,如所述(M·比尤斯等,二千零一十M·比尤斯等,二千零一十六帕茨格等人,2016年帕茨格等人,2016B)用电子显微照片对4-5只雄性小鼠的视神经进行评估,每个基因型在6个月龄时化学固定。每根视神经在7000x放大率下随机分布15张非重叠电子显微照片(一个场=220μm²)。电子显微照片评估使用图像j(斐济)(Schindelin等人,二千零一十二)每只小鼠至少有1600个轴突被分为三类:健康的有髓鞘轴突。健康出现的无髓鞘轴突和退化/退化轮廓。如果轴突被至少一层完整的致密髓鞘覆盖,则轴突被算作有髓细胞。通过轴突内存在管壁结构和无定形细胞质或髓鞘内不存在可识别轴突来识别退化/退化的轮廓。分别。髓鞘外流所占的面积采用点击计数法进行评估(埃德加等人,2009年帕茨格等人,2016年)相同的电子显微照片。简要地,0.25微米的规则网格放在图像上。与髓鞘外流同时出现的拦截数量与评估区域有关。G比值计算为轴突FERET直径与相应髓鞘FERET直径的比值。为了这个目的,评估了相同电子显微照片(一个场=55μm²)的左上方四分之一。每只老鼠至少产生200个有髓鞘的轴突。

对于聚焦离子束扫描电子显微镜(fib-sem)将5.5个月大的小鼠的视神经在4%甲醛(serva)和2.5%戊二醛(science services)的0.1 M磷酸盐缓冲液(pb)中固定24小时。样本主要是按照OTO协议处理的。www.ncmir.ucsd.edu/sbem-协议Deerinck等人,二千零一十)进行了一些修改:样品在0.1 m Pb(3×15 m in)中洗涤,在4°C条件下,在2%四氧化锇(OSO)中培养3小时。4)和0.25%亚铁氰化钾(K)4[Fe(CN)]])(电子显微镜科学)H洗O(3×15分钟),然后在室温下与0.1%硫碳酰肼(Sigma-Aldrich)孵育1小时。为了进一步增强对比度,用2%的OSO处理组织。4室温下90分钟。然后用H清洗样品。O(3×15分钟)在4°C下与2%醋酸铀酰(SPI化学)对比过夜并再次用H洗涤。O(3×15分钟)然后在增加的丙酮系列中脱水(30%,50%,75%,90%,3×100%)。随着杜尔库潘(Sigma Aldrich,组件A,Bc)每个2小时(25%,50%,75%杜尔库潘在丙酮中),然后在100%杜尔库潘中培养过夜。在将样品嵌入树脂块之前,将带有促进剂(组分D)的新鲜杜尔库潘加入样品中5小时。在60℃下将所述块聚合48小时。

用90°金刚石切边刀(硅藻股份,Biel瑞士)然后将这些块连接到扫描电镜存根(Science Services GmbH,插脚12.7 mm x 3.1 mm),由充银环氧树脂(环氧导电粘合剂,EPO-TEK EE 129–4;ems)并在60°下聚合过夜。使用溅射镀膜机em ace600(leica)在35 mA电流下用10 nm铂层对样品进行了镀膜。将样品放入横梁540聚焦离子束扫描电子显微镜(Carl Zeiss显微镜股份有限公司)。为了保证研磨均匀,保护表面,在感兴趣区域的顶部沉积了400纳米铂层。Atlas 3D(Atlas 5.1,菲比克斯,加拿大)软件用于收集3D数据。样品暴露在15纳电流下,用7NA电流对表面进行抛光。图像是在1.5千伏电压下用ESB探测器(450伏ESB电网,像素尺寸x/y 2nm)在连续研磨机中,使用700 pa的研磨孔径(z步进50 nm)获取模式。

对于图像分析,使用trackem2()进行校准。Cardona等人,二千零一十二)斐济的插件(Schindelin等人,二千零一十二)在斐济执行以下后处理步骤:在应用高斯模糊(sigma 2)和局部对比度增强(clahe:blocksize 56)之前,对数据集进行剪切和反转;柱状图箱100;最大坡度1.5)。图像被手动分割使用IMOD(Kremer等人,1996年

免疫组化

石蜡包埋脑切片的免疫组织化学检测神经病变,如(de Monasterio Schrader等人,2013年帕茨格等人,2016年)在出生后第75天评估每种基因型的5只雄性小鼠(p75)。抗体对MAC3有特异性(Pharmingen553322;1:400)神经胶质纤维酸性蛋白(gfap)(奴佛卡因NCL-L-gfap-ga5;1:200)或淀粉样前体蛋白(APP)(Chemicon MAB348;1:1000)。对于量化,选择海马膜,并计数阳性轴突球体。显微镜检查如前所述(帕茨格等人,2016年)定量白质区MAC3或GFAP免疫阳性,在显微照片上选择海马膜,并使用IMAGEJ插件进行半自动分析(de Monasterio Schrader等人,2013年吕德斯等人,2017年帕茨格等人,2016年)数据与野生型水平的平均值有关。组织切片上髓鞘的银浸染情况如所述(Gallyas一千九百七十九帕茨格等人,2016年)显微镜和图像拼接如所述(帕茨格等人,2016年

冷冻切片的视神经免疫组织化学检测ANLN和髓鞘败血症的表达和定位。帕茨格等人,2016年)抗体对ANLN(acris ap16165pu-n;1:200)9月7日(IBL18991;1:1000)Sept8(蛋白质技术组11769–1-AP;1:500)TUJ1(Covance MMS-435P;1:1000)神经丝(covance smi-31;1:1500)髓鞘相关糖蛋白(MAG克隆513;化学物质MAB1567;1:50)电压门控钠通道V1,6(alomonelabs ASC-009;1:500)或接触蛋白相关蛋白(caspr;神经单克隆抗体75-001;1:500)。二级抗体为驴α-兔-Alexa488(invitrogen A21206)。驴α-小鼠-Alexa488(invitrogen A21202)驴α-兔-ALEXA555(invitrogen A31572)驴α-小鼠-AlexA555(Invitrogen A31570)驴α-山羊-cy3(dianova 705-165-147)和驴α-小鼠染料633(yo-pro)。用共聚焦显微镜(徕卡SP5)获得图像,如(帕茨格等人,2016年)las af lite和fiji用于将图像导出为tif文件。伊玛瑞斯被用于三维重建。对于节点密度的量化,用斐济方法分析了两个caspr免疫阳性的双亲的发生频率。caspr免疫阳性率通过阈值进行转换,并使用itnc插件进行计数(n=4只小鼠,每种基因型,每个部分,5张大小为2500微米的脊髓白质随机显微照片每张显微照片)。使用graphpad prism 6.0进行统计分析。

髓鞘净化

用蔗糖密度离心法和渗透性休克法从小鼠脑中纯化出一种富含髓鞘的轻量膜组分。JAN等,2013年帕茨格等人,2016年)对于发育过程中髓鞘的免疫印迹分析,在指定年龄使用雄性野生型(C57BL/6N)小鼠。蛋白质组和免疫印迹分析安伦CKO小鼠和对照组(安伦佛罗里达州)使用P75的3只雄性小鼠。蛋白质浓度使用DC蛋白质分析(biorad)测定。对于ptdins(4,5)P测量,用磷酸酶抑制剂(罗氏磷酸酶抑制剂)从p75基因型的6只雄性小鼠中纯化髓鞘;每10毫升1片)添加到Tris缓冲盐水和蔗糖溶液中。

髓鞘蛋白质组分析

男性脑中髓鞘纯化的差异定量无标记蛋白组分析安伦采用无标签定量工作流程(基本上如所述)在p75进行CKO小鼠和对照小鼠实验。Ambrozkiewicz等人,二千零一十八帕茨格等人,2016年)简要地,与10μg髓鞘蛋白相对应的蛋白质部分在溶解缓冲液(7 M尿素,2米硫脲,10毫米DTT,0.1 m Tris ph 8.5),含1%ASB-14,在37°C下摇动30分钟。随后,用10体积的溶解缓冲液稀释样品,其中含有2%的Chaps,以降低ASB-14的浓度,并根据自动过滤辅助样品制备(FASP)方案进行处理,以用于胰蛋白酶的溶液内消化。根据TOP3方法,将回收的色氨酸肽的一小部分加入10 fmol/μl Hi3 Ecoli标准(Waters Corporation),用于蛋白质定量。席尔瓦等人,二千零六)本标准包含一组定量合成肽,代表从E中提取的前六个离子化胰蛋白酶肽。大肠杆菌伴侣蛋白CLPB。在配备离子迁移选择(Waters Corporation)的Synapt G2-S四极飞行时间质谱仪上,通过液相色谱耦合电喷雾质谱(LC-MS)直接对肽样品进行分析。分析是在离子迁移率增强的数据独立采集模式下进行的,具有漂移时间特定的碰撞能量,如(Distle等人,二千零一十四Distle等人,二千零一十六)明确地,采用了一种新的动态范围增强(DRE)数据采集策略。在一次扫描中,偏转透镜在完全离子传输和减少离子传输之间循环。这种方法在识别率(即蛋白质组深度)和动态范围,用于正确定量高含量髓鞘蛋白。使用Waters Proteinlynx Global Server(PLGS)3.0.2版处理连续液相色谱-质谱数据,并对UniProtKB/Swiss Prot小鼠蛋白质组进行数据库搜索(2016-07版,16806条)其中的序列信息为e。大肠杆菌伴侣蛋白CLPB,猪胰蛋白酶,并添加了每个条目的反向序列。蛋白质鉴定的错误发现率(FDR)被设置为1%的阈值。至于实验设计,每种情况下三只小鼠中枢神经系统的髓鞘蛋白组分(安伦CKO,ctrl)通过重复消化处理,每个生物复制产生两个技术复制,因此总共12个LC-MS运行,在免费软件isoquant()中进行比较。www.isoquant.net网站)后鉴定分析包括保留时间校准,精确质量和保留时间(EMRT)和离子迁移群集,数据规范化,异构体/同源过滤,以及按所述计算每种检测蛋白质的绝对样品量(Ambrozkiewicz等人,二千零一十八库哈雷夫等,2015年)将肽和蛋白质的fdr设置为1%阈值,并且使用TOP3方法仅对至少两个肽报告的蛋白质进行定量。百万分之一(ppm)丰度值(即每种蛋白质的相对量(w/w)相对于所有检测到的蛋白质的总和进行了log2转换,并通过适度的t-统计和经验Bayes方法检测到蛋白质丰度的显著变化,并对rstudio(Ambrozkiewicz等人,二千零一十八卡默斯等人,2015年)将髓鞘中一种蛋白质的基因型依赖相对丰度与高浓度进行比较,如果两者均具有统计学意义(Q值<0.01)且超过2倍的调节因子阈值,则认为其改变。

脂质提取和ptdins(4,5)P测量

将纯化的髓鞘在冰上用1毫升酸性提取溶剂(1.5毫升)解冻。乔和老板,一千九百九十五)含36%(v/v)ch哦,36%(V/V)CHCL,18%(v/v)2.4 M盐酸,以及9%(v/v)0.4 M EDTA,装在玻璃反应小瓶(73750–13100,Kimble Chase迈宁根德国)使用旋转式搅拌器(Ika,施陶芬德国)在冰上。样品在4°C下混合培养2小时,同时在猫摇器上摇动(Ballrechten,德国城市)。在600℃离心2分钟分离相。G,有机相被收集到一个新的玻璃管中。用500μl的CHCL重新提取样品两次。.在50%(v/v)浓度下,用1.5 ml 0.5 M HCl洗涤两次合并的有机相。哦。丢弃第一水相;在第二洗涤步骤之后,有机相被收集到一个新鲜的玻璃管中。采用双盲法对磷脂酰肌醇(4,5)-二磷酸(ptdins(4,5)P)提取物进行了分析。)使用组合薄层色谱法(TLC)和气相色谱法(GC),基本上如前所述(Goebbels等人,二千零一十K.Nyng等人,2008年)简要地,将髓鞘样品置于硅胶S60板(Merck,达姆施塔特德国)使用CHCL的展开剂CH哦,NH4哦:啊o(57:50:4:11伏/伏/伏)佩雷拉等,2005年)通过与真实标准(5μg;阿凡提极性脂质,雪花石膏,艾尔,美国)根据其脂肪酸含量重新分离和定量,由GC确定。对于GC分析,将重新分离的脂质溶解于MeoH/Toluol(2:1 v/v)中,加入5μg的三戊烷作为定量的内标物,并用0.5 M甲氧基钠(Sigma Aldrich,慕尼黑,德国)根据(霍龙等,2002年)在室温下培养30分钟后,通过添加0.5 ml 5 M NaCl(Sigma-Aldrich,慕尼黑,德国)和50μl的32%盐酸(Carl Roth,卡尔斯鲁厄德国)脂肪酸甲酯用2毫升己烷(Carl Roth,卡尔斯鲁厄德国)己烷相用2毫升DDH洗涤两次。o在流动氮气下干燥。在10μl乙腈(Carl Roth,卡尔斯鲁厄并转移到GC小瓶(订单号702287.1,VWR达姆施塔特德国)使用带有火焰离子化检测的GC2010PLUS气相色谱仪(Shimadzu,耶拿德国)配有DB-23毛细管柱(30 m x 250μm,0.25μm涂层厚度;J和W,安捷伦瓦尔德布朗恩,德国)氦作为载气在1毫升分钟内流动1.在220℃下注入样品。温度梯度为150°C,持续1分钟,最低8°C时为150–200°C1,最小25°C时为200–250°C1和250°C,持续6分钟,如前所述(K.Nyng等人,2008年)根据真实标准鉴定脂肪酸,并使用GC溶液软件(Shimadzu,耶拿德国)

免疫印迹

免疫印迹法按描述进行(帕茨格等人,2016年Schardt等人,2009年)抗体对ANLN(acris ap16165pu-n;1:1000)Sept2(蛋白质技术组11397–1-AP;1:500)9月4日(IBL JP18987;1:500)9月7日(IBL JP18991;1:5000)Sept8(蛋白质技术组11769–1-AP;1:2500)MAGErb等人,二千零三;敬请提供。谢伦·威默斯,巴塞尔;1:500)PLP/DM20(A431((荣格等,1996年;1:5000)环核苷酸磷酸二酯酶(CNP)(Sigma C5922;1:1000)MOG(克隆号8–18 c5(林宁顿等,一千九百八十四;1:5000;请由C提供。Linington格拉斯哥)SIRT2(ABCAM 67299;1:500)CD9(ABCAM AB92726;1:2000)Ca2(2)Ghandour等人,1980年AGhandour等人,1980年B;1:1000;由S.提供。Ghandour斯特拉斯堡)ATP1A1(ABCAM AB7671;1:2500)ATP1A3(ABCAM AB2826;1:1000)β3微管蛋白(tubB3/tuj1)(covance mms-435p;1:1000)。二级HRP偶联抗体为抗鼠抗体(Dianova 715-035-020;1:1000)-兔子(Dianova 711-035-152;1:1000)或-山羊(Dianova 705-035-003;1:500)。免疫印迹用Intas-Chemocam系统进行扫描。

定量RT-PCR

用qrt-pcr测定mRNA丰度,如(吕德斯等人,2017年帕茨格等人,2016年)用4个月大的具有指定基因型的雄性和雌性小鼠的胼胝体解剖。根据标准的平均值分析mRNA丰度。聚苯硫醚,基因型之间没有差异。在GRAPHPAD Prism 6.0中进行了统计分析。引物针对安伦(前进5’-acaaccaaag gacaaacttgc,反向5’-GCGTTCCAGG AAAGGCTTA,9月2日(前进5’-TCCTGACTGA TCTCTACCACGAA,反向5’-AAGCCTCTAT CTGGACAGTTCTTT)9月4日(前进5’-actgacttgt accgggatcg,反向5’-TCTCCACGT TTGCATGAT)9月7日(前进5’-Agaggaagc Agtatccttgg,倒车5’-tttcaagtcc tgcatagttcc),SEBT8(前进5’-CTGAGCCCCG GAGCCTGT,反向5’-CAATCCCAGT TTCGCCACA)CDC42(前进5’-GCTGTCAGT ATGTGGAGTGCT,反向5’-GGCTTCTT CGGTTCTGG)RHOB(前进5’-CAGACTGCCT GACATCTGCT,反向5’-GTGCCCACGCT AATTCTCAG)和标准聚苯硫醚(前进5’-CACAAAACGGT TCCCAGTTT,反向5’-ttcccaaaga cccatgctt)。

神经传导速度测量

在6个月大的麻醉雄性小鼠体内测量中枢神经系统的神经传导速度,如前所述。DiBaJ等人,二千零一十二帕茨格等人,2016年

工具书类

  1. 4
  2. 7
  3. 10个
  4. 十一
  5. 十二
    3d em的ncmir方法:一种制备连续块状扫描电子显微镜生物样品的新方法
    1. 蒂尔德林克
    2. 艾布斯洪
    3. 艾索尔一
    4. 马里埃利斯曼
    (2010)
    科学开放。
  6. 十三
  7. 十四
  8. 十五
  9. 十六
  10. 十七
  11. 18
  12. 十九
  13. 二十
  14. 二十一
  15. 二十二
  16. 23
  17. 二十四
  18. 25岁
  19. 26
  20. 二十七
  21. 二十八
  22. 二十九
  23. 三十
  24. 三十一
  25. 三十二
  26. 三十三
  27. 三十四
  28. 35岁
  29. 三十六
  30. 三十七
  31. 38岁
  32. 39岁
  33. 四十
  34. 41
  35. 四十二
  36. 四十三
  37. 44岁
  38. 四十五
  39. 四十六
    维持成人中枢神经系统中高蛋白脂质蛋白水平是保持髓鞘和轴突完整性的必要条件。
    1. 卡洛德
    2. 斯内斯勒
    3. 库什
    4. 帕茨格
    5. 荣格
    6. 韦姆比乌斯
    7. 卡纳夫
    8. 沃纳血红蛋白
    (2019)
    Glia10.1002/格里亚23549,30637801。
  40. 47岁
  41. 四十八
  42. 四十九
  43. 50
  44. 五十一
  45. 52
  46. 五十三
  47. 54
  48. 五十五
  49. 56
  50. 五十七
  51. 五十八
  52. 五十九
  53. 六十
  54. 六十一
  55. 六十二
  56. 六十三
  57. 六十四
  58. 65岁
  59. 六十六
  60. 六十七
  61. 六十八
  62. 69岁
  63. 七十
  64. 七十一
  65. 七十二
  66. 七十三
  67. 七十四
  68. 75岁
  69. 七十六
  70. 七十七
  71. 七十八

决定书

  1. 贝丝史蒂文斯
    审查编辑;波士顿儿童医院,美国
  2. 加里·L·韦斯特布鲁克
    高级编辑;沃伦研究所,美国
  3. 戴维·里昂
    审稿人;爱丁堡大学大不列颠联合王国
  4. 温迪·B·麦克林
    审稿人;科罗拉多大学安舒茨医学院,美国

为了提高透明度,188bet体育电竞eLife包括编辑决定书和随附的作者回复。显示了同行评审后发送给作者的信的一个经过轻微编辑的版本,表示最实质性的关切;通常不包括次要评论。

[编者注:未包括次要问题和更正,因此没有附带的作者回复。]

祝贺你,我们很高兴地通知您,您的文章,“阿尼林促进脓毒蛋白装配,防止中枢神经系统髓鞘病理性外流”,已被接受发表于188bet体育电竞.

这项研究代表了他们之前研究的重要进展,确定脓毒症对中枢神经系统中成熟髓鞘形态的维持至关重要,似乎完全适合在188bet体育电竞作为“研究进展”论文。在这里,作者评估了细胞骨架衔接蛋白阿尼林在中枢神经系统髓鞘化中的作用:他们令人信服地表明,阿尼林在髓鞘化胶质中的表达和定位与脓毒蛋白相似。它的破坏会对髓鞘的维持产生非常特殊的影响。作者进一步证明,阿尼林似乎对化粪池蛋白定位到髓鞘本身至关重要,这是一个关键的观察中心的前提下,阿尼林是一个关键的调节器化粪池组装髓鞘的维护。具体审查意见如下。

审稿人1:

“阿尼林促进脓毒蛋白装配,防止中枢神经系统髓鞘病理性外流”,Erwig等人,代表了他们以往研究的一个重要进展,即败血症对维持中枢神经系统成熟髓鞘形态至关重要,似乎完全适合在188bet体育电竞.在他们的新研究中,埃尔维格等人。评估细胞骨架衔接蛋白在中枢神经系统髓鞘化中的作用:他们发现它的表达和定位与髓鞘化胶质中的败血素相似。它的破坏会对髓鞘的维持产生非常特殊的影响,即髓鞘外流的形成。作者进一步证明,阿尼林似乎对化粪池蛋白定位到髓鞘本身至关重要,这是一个关键的观察中心的前提下,阿尼林是一个关键的调节器化粪池组装髓鞘的维护。

实验包括条件敲除小鼠的产生和分析,生物化学,髓鞘的质谱分析,随着时间的推移,对蛋白质定位的有力评估,突变体髓鞘形成的详细电子显微镜评估,电生理功能评估,以及基于三维电子显微镜的外翻病理学重建。核心分析以绝对最高标准进行,陈述清楚,得出的结论与数据完全一致,并由其他控制进一步支持,例如兰维尔淋巴结的失调可能导致传导损伤。

我其实根本没有什么大的批评。我们可以要求更多的分析和更深入的机械探索,但对我来说,这本手稿已经提供了一个重要的进展,可以按原样出版。

审稿人2:

这个小组以前在一篇发表在188bet体育电竞阿尼林和败血症沿着髓鞘形成细丝,维持髓鞘节间的正常致密组织。他们也令人信服地表明,没有一个败血病导致异常鞘延伸和形成髓鞘外翻。在目前的工作中,他们研究了与脓毒症相关的结合蛋白阿尼林的作用,并表明相应基因的遗传缺失导致与缺乏SEPT8的小鼠相似的神经病理学(即,大约3%的纤维表现出髓鞘外翻)。他们还发现,缺乏苯胺会导致包括败血症在内的几种细胞骨架蛋白的表达减少。以及磷酸肌醇的降低水平。他们得出结论,阿尼林是必需的败血素为基础的髓鞘支架。

审稿人3:

Erwig等人的研究重点研究脓毒蛋白在中枢神经系统髓鞘中的作用。在之前188bet体育电竞纸张(Patzig等人,2016年)这组研究表明,髓鞘中败血症的消失导致髓鞘外流。一种脓毒蛋白相互作用蛋白,阿尼林也被下调了。这篇手稿进一步说明了这一观点,说明条件性阿尼林缺失导致的表型与脓毒蛋白条件性缺失动物基本相同。

这份手稿中的数据发展良好,令人信服。写作是直截了当的。然而,有几点引起了人们的关注,即这项研究是否显著地推动了该领域的发展。化粪池和阿尼林的相互作用已经建立了至少15年,在许多论文中,提出了阿尼林“指导”化粪池丝装配的概念。因此,阿尼林的损失与败血病的损失相当,这一观察并非出乎意料。阿尼林参与髓鞘中化粪池丝装配的作用在早期的Patzig等人纸张,进行了许多几乎相同的分析,演示,例如,败血症引起的阿尼林蛋白而不是RNA的损失,这里,阿尼林的丢失导致败血素蛋白的丢失,而不是RNA的丢失。这项研究清楚地提出了新的信息,如上所述,这些研究执行得很好。尽管如此,新的数据主要证实了已发表的研究表明,阿尼林参与了许多细胞中的化粪池组织。早期的Patzig研究表明,包括阿尼林参与在内的化粪池组装对髓鞘结构至关重要,即它可以防止压缩髓鞘的不适当外翻。

这项研究和早期的Patzig研究的一个意外因素是,在两种败血素/氨苄青霉素敲除的情况下,传导速度在p75处都发生了改变,但没有明显的轴突病理学。尽管如此,在这两组动物中,髓鞘外流随着动物年龄的增长而急剧增加。一个尚未解决的问题是,当髓鞘外翻增加时,是否存在轴突病理或更大的传导速度变化。

总体而言,这是一项扎实的研究,扩展该小组早期的工作重点是脓毒蛋白在髓鞘结构中的作用。然而,因阿尼林而有条件地删除小鼠的髓鞘外翻结果并不意外,本研究没有提供更深入的见解,了解化粪池如何调节和防止此类外流。

网址:https://doi.org/10.75188bet体育电竞54/elife.43888.018

文章和作者信息

作者详情

  1. 米歇尔·埃尔维格

    神经遗传学系,马克斯普朗克实验医学研究所,哥廷根,德国
    贡献
    调查,进行了以下未指定的所有实验,进行统计分析,有助于分析和解释数据,为撰写手稿作出贡献并批准了要出版的版本
    竞争性利益
    未宣布竞争利益
  2. 朱丽亚帕茨格

    神经遗传学系,马克斯普朗克实验医学研究所,哥廷根,德国
    贡献
    调查,有助于研究的概念和设计,为撰写这篇文章做出了贡献,并批准了要出版的版本。
    竞争性利益
    未宣布竞争利益
  3. 安娜·M·斯泰尔

    1. 神经遗传学系,马克斯普朗克实验医学研究所,哥廷根,德国
    2. 电子显微镜核心单元,马克斯普朗克实验医学研究所,哥廷根,德国
    3. 纳米显微镜和大脑分子生理学中心,哥廷根,德国
    贡献
    调查,执行,分析和解释了fib-sem,为撰写这篇文章做出了贡献,并批准了要出版的版本。
    竞争性利益
    未宣布竞争利益
  4. 帕亚姆·迪巴吉

    神经遗传学系,马克斯普朗克实验医学研究所,哥廷根,德国
    贡献
    调查,执行,分析和解释电生理测量,为撰写这篇文章做出了贡献,并批准了要出版的版本。
    竞争性利益
    未宣布竞争利益
  5. 马雷克·海尔曼

    细胞生物化学系,生物化学与生物技术研究所,马丁路德大学哈雷,德国
    贡献
    调查,执行并分析PIP2测量,为撰写这篇文章做出了贡献,并批准了要出版的版本。
    竞争性利益
    未宣布竞争利益
  6. 英戈·海尔曼

    细胞生物化学系,生物化学与生物技术研究所,马丁路德大学哈雷,德国
    贡献
    监督,方法论,分析和解释PIP2测量值,为撰写这篇文章做出了贡献,并批准了要出版的版本。
    竞争性利益
    未宣布竞争利益
  7. 雷蒙娜·B·荣格

    神经遗传学系,马克斯普朗克实验医学研究所,哥廷根,德国
    贡献
    调查,有助于生化分析,为撰写这篇文章做出了贡献,并批准了要出版的版本。
    竞争性利益
    未宣布竞争利益
  8. 凯瑟琳库施

    神经遗传学系,马克斯普朗克实验医学研究所,哥廷根,德国
    贡献
    监督,调查,执行,分析和解释了qrt-pcr,为撰写这篇文章做出了贡献,并批准了要出版的版本。
    竞争性利益
    未宣布竞争利益
  9. 维贝克-莫比乌斯

    1. 神经遗传学系,马克斯普朗克实验医学研究所,哥廷根,德国
    2. 电子显微镜核心单元,马克斯普朗克实验医学研究所,哥廷根,德国
    贡献
    监督,方法论,有助于分析和解释电子显微镜和fib-sem数据,为撰写这篇文章做出了贡献,并批准了要出版的版本。
    竞争性利益
    未宣布竞争利益
    Orcid图标 “此orcid id标识本文作者:”0000-0002-2902-7165号
  10. 奥拉夫詹恩

    蛋白质组学组,马克斯普朗克实验医学研究所,哥廷根,德国
    贡献
    调查,方法论,执行,分析和解释蛋白质组分析,为撰写这篇文章做出了贡献,并批准了要出版的版本。
    竞争性利益
    未宣布竞争利益
  11. 克劳斯·阿米恩·纳夫

    神经遗传学系,马克斯普朗克实验医学研究所,哥廷根,德国
    贡献
    撰写评论和编辑,有助于设计实验,为撰写这篇文章做出了贡献,并批准了要出版的版本。
    竞争性利益
    查看编辑器,188bet体育电竞
    Orcid图标 “此orcid id标识本文作者:”0000-0001-8724-9666号
  12. 豪克·B·沃纳

    神经遗传学系,马克斯普朗克实验医学研究所,哥廷根,德国
    贡献
    概念化,监督,起草原稿,撰写评论和编辑,构想,设计并指导研究,分析和解释数据,撰写文章并批准要发布的版本
    用于通信
    HauKe.E.M.G.DE
    竞争性利益
    未宣布竞争利益
    Orcid图标 “此orcid id标识本文作者:”0000-0002-7710-5738号

基金

Deutsche Forschungsgeminschaft(WE2720/2-2)

  • 豪克·B·沃纳

Deutsche Forschungsgeminschaft(WE2720/4-1)

  • 豪克·B·沃纳

欧洲研究理事会(高级基金会)

  • 克劳斯·阿米恩·纳夫

资助者在研究设计中没有作用,数据收集和解释,或者决定将作品提交出版。

确认

我们感谢法伦霍尔兹,D黑塞乌库茨克C纳迪斯,T Ruhwedel和M Schindler提供技术支持,S·甘道尔,C Liniton和N Schaeren-Wiemers抗体,和斯坦泽讨论。AMS由“卓越集群”和德国福斯chunggeminschaft(DFG)研究中心纳米显微镜和大脑分子生理学(CNMPB)资助。K-AN持有ERC高级补助金(“Myelinano”)。这项工作得到了德意志联邦证券交易委员会(DFG)的支持(授予我们2720/2–2和我们2720/4–1给HBW)。

伦理学

动物实验:根据德国动物保护法,所有实验均由Nieders_chisches Landesamt F_r Verbraucherschutz und Lebensmittelsicherheit(许可证33.19-42502-04-15/1833)批准。

高级编辑

  1. 加里·L·韦斯特布鲁克,沃伦研究所,美国

审阅编辑器

  1. 贝丝·史蒂文斯,波士顿儿童医院,美国

审阅者

  1. 戴维,里昂,爱丁堡大学大不列颠联合王国
  2. 温迪·麦克林,科罗拉多大学安舒茨医学院,美国

出版历史

  1. 收到时间:11月26日,二千零一十八
  2. 接受日期:1月11日二千零一十九
  3. 发布的记录版本:1月23日,2019(第1版)

版权

2019年埃尔维格等人。

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韵律学

  • 二十九
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通过在以下来源中轮询最高计数生成的文章引用计数:交叉裁判公共医学中心狼疮.

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